※ 引述《ndmcls (季勖)》之铭言： : ※ 引述《wulito (考完闷的紧)》之铭言： : : 取菌液 1 c.c. : : 以 10000 xg 离心5分钟 : : 取沉淀 改加入 200ul 无菌水 : : 煮沸 10mins 以 10000 xg 离心 5 mins : : 取上清液後 : : 取 2ul 跑 PCR : 如果你只是要测试一下有没有 plasmid, 那还不如直接用 single colony : 取一点来跑 pcr. : 其实最好的办法是先把 plasmid 抽出来(现在 kit 那麽多, 不然自己配 : 也行), 先看看你到底有没有真的把 dna 转进去. 如果只是要粗略监定,因为ＫＩＴ也是很贵的....... 可以用quick check 的方式,方法可以自行到网站找 大略方法如下 挑single colony,养在1ml中,过三四个小时（看得见沙沙的就可以） 取50～100出来,离心并去除上清液 再加30ul的水重新悬浮 然後再加30ul的phenol/chloroform shake+ 13000RPM离心 最後取上清液5~10ul去跑ＤＮＡ gel 不用load marker,但要加control组一起跑 （第一次玩，可以加control的colony 一起处理,再加外laod一组是纯化的DNA看看） 如果有insert，应该会看到up- shift 除非你的size很小，不然跑1.2﹪的gel就很适合了 : : 之後以 95度 5 mins 1 cycle : : 95度 30 sec : : 55度 1 mins : : 72度 30 sec 35 cycle : 人家也问了, 你的 insert 有多长? 没有一个 pcr program 跑天下的. --

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