※ 引述《kuuro》之铭言： > packaging cells 被 transfected retroviral vector 之後可用药筛选, 使virus > producing cells 增加, 但是问题是那些不产生virus的细胞不是也会被感染吗 ? > 感染之後也具有抗药性了吧? 未被transfected成功的cell不具抗药性. 已被transfected成功的cell在一段时间 後会抵抗superinfection并产生daughter virus. daughter virus的确可以继续感染 其他未被transfected的cell. 在想会不会发生这种感染後果前, 得要先想两个问题: 1. virus packaging signal 是vector带来的还是cell line自带的.(各家设计不同) 2.市面上常见的商用retrovirus系统为安全起见, 制造出来的retrovirus蛮多是 具有感染力, 但无法自我复制再制造更下一代的, 全部必须元素gag/pol/ltr都到齐了吗? (所以我们可能将不会从这些後期感染细胞上捞到更多retrovirus, 看signal在哪而定). 当然若是系统设计理念相容, stable production of retrovirus也是不错的, 只是选出来的就是特定clone的virus, 有时会突显genetic background, 与stable clone的问题类似. >另外 先用ectotrophic packaging cell 产生的virus > 去感染 amphotrophic packaging cell 可进一步增加virus titre, 我没有这样做过, 是否可以请您比较一下用同样cell line的放大效果? recombinant virus太复杂的话, 也无法无限制的永远放大下去, 应该不会有人用个P20的virus吧? :) >为何一定要先 > 用ectotrophic 呢? ^^^^^^^^^^^^^^^安全性问题与试剂用量最小化吗? >amphotrophic 和 ectotrophic 的不同不是只在於env吗? 的确可以做到只有此点不同. (env或对应receptor/ligand的组合) 其他问题可以参考Clontecl的Retroviral Gene Transfer and Expression User Manual http://www.clontech.com/clontech/techinfo/manuals/PDF/PT3132-1.pdf -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐ ◢　◤ ★ 线上音乐新震撼 ★ ◢　◤ │ bbs.kkcity.com.tw │ ^_^ / 随选随播免等待 KKBOX◤ ^_^ / └──《From: 》──┘ 　 ◤ http://www.kkbox.com.tw 　 ◤ --