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标 题为何我的6xHis-protein在nickel column拉梯度之初,就被洗出来!
发信站中山计中美丽之岛 (Wed Nov 2 11:47:47 2005)
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为何我的6xHis-protein在nickel column拉梯度之初,就被洗出来?
我利用大肠杆菌来表现6xHis-protein,
经过IPTG诱导後,
破菌!
将上清液灌入nickel column,
在wash时, 没事!
但是在0~500 mM imidazole拉梯度（二十倍体积）之初,
我的6xHis-protein 在一开始（一倍体积）体积, 就被洗出来!
所以我的nickel column拉梯度图,
就在最前面只出现了一根很大根的peak!
然後就持平到最後,
经过western blotting分析後才发现,
我的6xHis-protein在前面这根很大根的peak里面,
但是这根很大根的peak里面还伴随着数百种蛋白质,
请问怎麽会这样呀?
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* Origin: 中山大学-美丽之岛BBS * From: 140.109.55.225