※ 引述《[email protected] (酒後驾车)》之铭言： > 我跑western blotting一直跑的很丑... > 像是在run stacking gel时...sample老是压不平.. > 或是呈色时整个背景会脏...但是我blocking都overnight.. > 再来就是呈色出来的band会散掉... > 试了好几次都这样...觉得很沮丧.... > 有人可以教教我吗...--~~ 其实跑完胶之後..还可以把transfer完的胶拿去染..看看是不是真的跑的很丑.. transfer的时候..membrane放到胶上尽量不要又抹来抹去.. transfer完Blocking其实30 min就够了...1抗可以室温30min~1hr或4度O/N.. 一抗完要用PBST/PBS wash 5 min 4~5次..之後下二抗..室温30min就可以了.. 完了一样要wash..呈色之後..压片时要一下就放到正确的位子..不要又抹来抹去.. 拿起来的时候也一样..大概就这样吧..background太深可能是1抗/2抗没洗乾净 band散掉可能是压片的时候糊到了... 一些小细节注意一下应该就可以跑的很漂亮了... Good luck... -- ┌─────◆ＫＫＣＩＴＹ◆─────┐ ╱ ╱ ￣ ▌￣ ￣ ╲╱ ＢＢＳ 城邦 │ bbs.kkcity.com.tw │ ╲ ╲ ╴ ▌ ▌ ▏ ＫＫ免费拨接 └──《From:140.116.98.2 》──┘ http://www.kkcity.com.tw/freeisp/