看板Biology
标 题Re: 如果送入的plasmid会造成E coli的死亡
发信站KKCITY (Fri Jul 4 23:57:36 2003)
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※ 引述《[email protected] (论文超难写)》之铭言：
> 我将我想表现蛋白质的DNA接入expression vector
> 送入E coli中
> 发现根本挑不到我想要的plasmid
> 整个plate中会长出来的尽是些杂菌
> 同样状况下的ligation,transform
> 不同的DNA plasmid早已被我接出了
> 这情形大约快半年
> 我使用的expression vector有pET30, pTrc99, pGEX5X-1
> E coli则有DH5(alpha), XL1Blue, BL21(DE3)
> 都试过但却没一个接出 > <
> 假设我的技术没问题下
> 我还有什麽方法可以得到可以表现此DNA的clone呢??
> 比如说换什麽vector或着E coli等等....
> 有建议就提出来罗
> 谢谢!!
1. Plate上有杂菌应该是抗生素加的量不够,或是养太久让抗生素失效了...
2. 若考虑是不是ligation的问题,可以做ligation check,拿个vector 和insert primer
跑个PCR就知道了..
3. 如果ligation check没问题,可能是competent cell的efficiency不好..
可以再重做competent cell(test efficiency=>1ng DNA 10乘以5次方颗菌以上)
4. 要不然就可能是技术上操作的问题了...Good luck !!!
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