Protein Science2002那篇是以intact protein为主 Fig2,3 是利用ESI-MS去观察protein的folding和unfolding state 当protin unfolding时,所有AA露出来的时候 在ESI喷洒过程就很容易带电 所以看到的unfolding的charge比folding高 另外在fig2他就moniter 他的folding state和unfolding state的分布,算出Tm 这个部分主要是跟CD的data比较(Fig3,4) Fig4是说当protein denaturation越严重的时候,CD angle算出来会越低 Fig5去monitor他的Tm (不过我到现在还不是很清楚他为什麽要用那两种药剂让active site有东西) (知道的人跟我说一下吧!!) 比出来的结果是oxi-TRX差3-5度, red-TRX 差10 (他後面有讨论原因可是我不太想看,所以大家各自表述吧!!) Fig6,就是做整各intact protein的H/D exchange 最下面那个peak是当所有的protein中的H都被交换的分子量 中间那一些是只不同时间内交换的程度 他文中有叙述哪些会被先交换及他的交换结果和分子量的shift是吻合的 (一开始交换会是先AA side change, 当到conformation blocken时amide bond才可以 开始交换,所以他可以去算较易交换的H数目) 另外有提到当今天是EX2 type mechanism(K-1>>K2)交换较慢 所以他的'peak只一个peak, 有两各peak的是走EX1 type mechanism这是属於交换比较快 的部分(K2>>K-1) Fig7,就是做thermal effect的实验,也是一样的原理(同上,但是peak的情况为什麽不依样 我也很困惑) Fig8是要比较四种不同enzyme的结构是否有所差异 结论就是Red-TRX结构较松散,Oxd-TRX较紧密 (废话,一个是有disulfide bond 一个没有) 但是fig8B的图我看不太懂因为理论上back exchange应该会使D的组成越来越低 可是他的图却越来越高 所以我不太了解这个部分 总而言之,MS的方法只能说是进一步confirm 你在CD或是NMR上面看到的data 这是很小一群做直谱的人在做的事 我也不太清楚老师怎麽这麽有兴趣做这个?? 不懂~~~ --

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